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SuperScript® VILO™ cDNA 合成试剂盒

 

The SuperScript® VILO™ cDNA Synthesis Kit is designed to increase cDNA yields and improve the dynamic range of your qRT-PCR assays.This means that you obtain the same relative representation in your cDNA, irrespective of the abundance level of your gene of interest.

优异的线性度

  • 希望 RT 反应能得到一致的结果吗?希望在最宽泛的起始样本量范围下都得到前所未有的线性关系吗? 使用 SuperScript® VILO™ cDNA 合成试剂盒,就可以做到:
    • 对基于探针的两步法 qRT-PCR,在 20ul 反应中总 RNA 为 1pg 到 2.5ug 时的 cDNA 产量呈线性
    • 对于 SYBR® GreenER™ 两步法 qRT-PCR,在 20ul 反应中总 RNA 为 1pg 到 100ng 时的 cDNA 产量呈线性
    如果需要得到更多的 cDNA,可将反应体系放大至 100ul,反应仍然保持相同的线性关系。

    在 RT 步骤中得到优异的线性关系意味着:
    • 不管基因丰度如何,cDNA qPCR 模板的相对代表性都能反映相应基因的丰度
    • 在归一化过程中,虽然在起始材料中丰度不同,但目的基因和参照基因的 cDNA 都为线性合成
    • 通过降低这种常见偏差,获得更准确的 qRT-PCR 数据
    • 图 1. SuperScript® VILO™ cDNA 合成试剂盒 可在更宽线性范围的 RNA 起始用量下获得可靠的结果。将 HeLa 细胞的总 RNA 进行系列稀释,用 SuperScript® VILO™ cDNA 合成试剂盒进行反转录,然后在 ABI PRISM® 7900HT 实时定量 PCR 仪器上,用通用型 EXPRESS qPCR SuperMix (Invitrogen) 和人的 β-肌动蛋白的 TaqMan® 探针和引物对 (Applied Biosystems) 进行 qPCR 反应,每个稀释度做 3 孔重复。标准曲线 (A) 表明,即使超出了建议的 1 pg 至 2.5 μg 的最适起始用量范围,该试剂盒可在采用高达 5 μg 的 RNA 样品进行实验时其相关系数达到 0.996。从扩增曲线 (B) 可以看出,三孔重复样品在所有稀释度下都能得到一致的结果,这表明 SuperScript® VILO™ cDNA 合成试剂盒可在更宽线性范围的 RNA 起始用量获得很好的结果。用参比基因来标化低丰度基因,无需担心不同的 RNA 起始用量可能导致的反转录效率的偏差。

      提高产量并降低 qPCR 抑制

      • SuperScript® VILO™ cDNA 合成试剂盒能生成更高产量的 cDNA,同时对下游 qPCR 的抑制作用更少。这意味着您能:
        • 对 cDNA 进行存档,以用于将来的研究
        • 可在 qPCR 中使用更多的 cDNA,提高灵敏度 4 倍,而不必担心反应受到抑制

        此优势是通过很好地平衡了 SuperScript® III RT、RNaseOUT™ RNase 抑制剂、和加入的专有辅助蛋白而获得的。当靶标为低拷贝时,qRT-PCR 试剂具有的优势则更为明显。
      • 图 2. 在实时定量 PCR 应用中,SuperScript® VILO™ cDNA 合成试剂盒的 PCR 抑制作用更小,灵敏度更高。  通过掺入 32P-dCTP 来分析 cDNA 产量。使用相同用量的起始 HeLa RNA,比较三种不同试剂盒的 cDNA 产量:适用于 qRT-PCR 的 Invitrogen SuperScript® III 第一链合成 SuperMix (Invitrogen SuperScript® III First-Strand Synthesis SuperMix for qRT-PCR)、SuperScript® VILO™ cDNA 合成试剂盒及 MMLV。结果显示 VILO™ 试剂盒的 cDNA 合成产量是另一 Invitrogen 试剂盒的 3 至 4 倍,是 MMLV 的 8 至 9 倍。
      • 图 3. SuperScript® VILO™ cDNA 合成试剂盒的产率比同类竞争产品更高。分别采用 SuperScript® VILO™ cDNA 合成试剂盒(蓝线表示)或 Mulv 竞争试剂盒(绿线表示)对来自 HeLa 细胞的总 RNA(2 μg 和 1 ng)进行反转录,,然后在 ABI PRISM® 7900HT 实时定量 PCR 系统上,结合使用特异性扩增 β-肌动蛋白的 TaqMan® 分析试剂盒 (β-actin–specific TaqMan® assay) (Applied Biosystems) 和 EXPRESS qPCR SuperMix Universal (Invitrogen) 进行 qPCR 反应(每种样品设置 3 个平行反应)。无论 RNA 起始样本是高或低,SuperScript® VILO™ cDNA 合成试剂盒都比 Mulv 竞争试剂盒至少少 2 个循环数,表明灵敏度增加了 4 倍。
      • 检测灵活性

        • 无论用什么检测方法,都能使用 SuperScript® VILO™ cDNA 合成试剂盒获得最灵敏的 qPCR 性能。使用任意一种基于 SYBR® 实时定量 PCR 检测的探针,相比于其它可用试剂盒,有望将灵敏度增加多达 8 倍。SuperScript® VILO™ cDNA 合成试剂盒可单独提供,也可作为全新 qPCR 和 qRT-PCR 试剂 EXPRESS 系列(用于快速循环、实时定量 PCR 仪器)的一部分提供。
        • 图 4. SuperScript® VILO™ cDNA 合成试剂盒能与 SYBR® Green 染料法或荧光探针/引物法 qPCR 检测方法联合使用。A. 分别使用下列试剂盒反转录等量的 (10 pg) HeLa 细胞总 RNA:Invitrogen 的 SuperScript® VILO™ cDNA 合成试剂盒(蓝线表示)、Bio-Rad 的 iScript™ cDNA 合成试剂盒(黄线表示)、Qiagen 的 QuantiTect® 反转录试剂盒(绿线表示)以及 Stratagene 的 AffinityScript® QPCR cDNA 合成试剂盒(粉红色表示)。然后使用 hsp70 基因特异性引物和 Invitrogen SYBR® GreenER™ qPCR SuperMix,以反转录获得的 cDNA 为模版在 ABI PRISM® 7900HT 实时定量 PCR 仪器上进行扩增,每个样品重复三次。在 SYBR® Green 检测中,与其它试剂盒相比,SuperScript® VILO™ cDNA 合成试剂盒更高的灵敏度,图中显示 Ct 值比其它试剂盒至少早 2 个循环。B. 使用与 A 相同的试剂盒反转录等量的 (1 μg) HeLa 细胞总 RNA。然后使用 TfR 基因特异性 TaqMan® Assays (Applied Biosystems) 和预混 ROX 的 EXPRESS qPCR SuperMix,在 ABI PRISM® 7900HT 实时 PCR 系统上对所得的 cDNA 进行扩增,每个样品重复三次。在基于探针法的检测中,与其它试剂盒相比,SuperScript® VILO™ cDNA 合成试剂盒具有更高的灵敏度,图中显示 Ct 值比其它试剂盒至少早 2 个循环。

      Ordering Information

      Sku Product Catalog Size Price Quantity
      11754-050   SuperScript® VILO™ cDNA synthesis kit  50 × 20 µl reactions
       
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      11754-250   SuperScript® VILO™ cDNA synthesis kit  250 × 20 µl reactions
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